服務(wù)熱線
400-021-2200
| 品牌 | Cygnus Technologies |
|---|
現(xiàn)貨供應(yīng) *
產(chǎn)品英文名稱：E.coli HCP ELISA Kit
產(chǎn)品中文名稱：大腸桿菌宿主細(xì)胞ELISA檢測(cè)試劑盒
E.coli HCP ELISA試劑盒 產(chǎn)品介紹：
E.coli HCP試劑盒主要設(shè)計(jì)用于檢測(cè)產(chǎn)物重組表達(dá)過程中大腸桿菌宿主細(xì)胞污染，試劑盒使用的多克隆抗體對(duì)數(shù)百種HCPs具有反應(yīng)性。檢測(cè)zui低濃度可達(dá)到 0.2ng/mL。
ELISA檢測(cè)相比Western Blot：Western Blots檢測(cè)過程復(fù)雜并需借助程序分析結(jié)果。而且，Western Blot本質(zhì)上是定性分析，不能得到定量結(jié)果，檢測(cè)靈敏性也受到樣本體積的限制。Western Blot在下游純化過程中檢測(cè)產(chǎn)物HCPs缺乏靈敏度和特異性。而微量滴定板ELISA檢測(cè)可以克服上述限制。ELISA具備高度靈敏性，可獲得半定量結(jié)果，是純化工藝，過程控制，常規(guī)質(zhì)量檢測(cè)的*選擇。
§檢測(cè)原理：大腸桿菌E. coli檢測(cè)是一個(gè)雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫檢測(cè)。樣本中包含的E. coli HCPs蛋白與標(biāo)記有抗-CHO抗體的辣根過氧化物酶同時(shí)反應(yīng)，反應(yīng)發(fā)生在之前涂有一層吸附性抗-CHO蛋白抗體的微量滴定板中進(jìn)行。免疫反構(gòu)成為夾層式結(jié)構(gòu)：固相抗休-HCP-酶標(biāo)記抗體。反應(yīng)結(jié)束后清洗微量滴定板去除未結(jié)合反應(yīng)物。添加TMB作用底物反應(yīng)。微量滴定板讀數(shù)器上測(cè)定水解物濃度，水解物濃度與CHO HCPs蛋白濃度成比例。用提供的標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)讀數(shù)可以計(jì)算出E. coli HCPs蛋白含量。
§檢測(cè)過程：取出所有試劑平衡到室溫→分別移取25µl標(biāo)準(zhǔn)液，對(duì)照物和樣品至待測(cè)孔→移取100µl anti-E. coli:HRP（#F411）至每孔→密封滴定板，搖床室溫溫育90分鐘，180rpm→清空小孔，用紙吸干殘留液，350µl清洗緩沖液清洗4次→加100µl TMB 作用物（#F005）→室溫靜置30分鐘，不需搖床→加100µl反應(yīng)終止液（#F006）→分光光度計(jì)450/650nm讀數(shù)
§結(jié)果分析：標(biāo)準(zhǔn)液（0, 1, 3, 12, 40, 100ng/mL）可用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)液濃度相當(dāng)于免疫反應(yīng)HCP總濃度。根據(jù)測(cè)定的小孔中標(biāo)準(zhǔn)液吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。數(shù)據(jù)分析可以使用計(jì)算機(jī)選配曲線，例如點(diǎn)到點(diǎn)，三次樣本函數(shù)，或四參數(shù)邏輯曲線。不要使用線性回歸分析修改樣品吸光值，這樣會(huì)出現(xiàn)顯著誤差。也可以手工繪圖，Y軸標(biāo)注吸光值，X軸標(biāo)注濃度，然后用光滑曲線連接各點(diǎn)。然后根據(jù)樣品吸光值計(jì)算出樣品中HCP濃度。（操作時(shí)每一濃度標(biāo)準(zhǔn)液都要滴定到兩個(gè)小孔中，以便計(jì)算平均分光光度值，樣品也需計(jì)算平均吸光值）。
CHO HCP ELISA組成成份：
● Anti- E. coli:HRP（辣根過氧化物酶標(biāo)記） 1x12mL F411（Product#）
● Anti- E. coli coated微量滴定板 12x8孔 F412
● E. coli HCP標(biāo)準(zhǔn)液（0, 1, 3, 12, 40, 100ng/mL） 1mL/瓶 F413
● Stop Solution終止液（0.5M硫磺酸） 1x12mL F006
● TMB （3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯氨） 1x12mL F005
● Wash Concentrate清洗物（20倍濃縮） 1x50mL F004
E.coli HCP ELISA kit英文簡(jiǎn)述：
This kit was developed using broadly reactive polyclonal antibodies to the hundreds of different HCPs and is intended for use in determining the presence of E.coli host cell protein contamination in products manufactured by recombinant expression. Our assay validation has determined that the LOD for this kit is ~0.2ng/mL.
重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司