一、CIK細(xì)胞療法

1、CIK細(xì)胞介紹

    細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷（cytokine-induced killer，CIK）細(xì)胞，是將人外周血單個(gè)核細(xì)胞在體外用多種細(xì)胞因子（如抗CD3單克隆抗體、IL-2和IFN-γ等）共同培養(yǎng)一段時(shí)間后獲得的一 群異質(zhì)細(xì)胞。由于主要效應(yīng)細(xì)胞同時(shí)表達(dá)CD3和CD56兩種膜蛋白分子，故又被稱為NK細(xì)胞樣T淋巴細(xì)胞，兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和NK細(xì)胞的非 MHC限制性殺瘤優(yōu)點(diǎn)。因此，CIK細(xì)胞被認(rèn)為是新一代抗腫瘤過(guò)繼細(xì)胞免疫治療的方案。

    CIK細(xì)胞中的效應(yīng)細(xì)胞CD3+CD56+細(xì)胞在正常人外周血中極其罕見(jiàn)，僅1%～5%，在體外經(jīng)多因子培養(yǎng)28～30天，CD3+CD56+細(xì)胞迅速增多，較培養(yǎng)前升幅可達(dá)1000倍以上。實(shí)驗(yàn)證明，擴(kuò)增出的CD3+CD56+細(xì)胞來(lái)源于外周血中的CD3+CD56-T細(xì)胞和CD4-CD8+T細(xì)胞，而非CD3-CD56+NK細(xì)胞。比較CD3+CD56+CIK細(xì)胞中表達(dá)CD8+和CD8-的兩群細(xì)胞其殺瘤活性沒(méi)有顯著性差異，提示CIK細(xì)胞的細(xì)胞毒性與CD3CD56表達(dá)成相關(guān)趨勢(shì)，而與CD8的表達(dá)未表現(xiàn)出相關(guān)性。

2、CIK細(xì)胞治療殺傷原理

    CIK細(xì)胞能夠通過(guò)三種途徑殺滅腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞： 

    CIK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的直接殺傷：CIK細(xì)胞可以通過(guò)不同的機(jī)制識(shí)別腫瘤細(xì)胞，釋放顆粒酶/穿孔素等毒性顆粒，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞裂解。 　　

    CIK細(xì)胞釋放的大量炎性細(xì)胞因子具有抑瘤殺瘤活性：體外培養(yǎng)的CIK細(xì)胞可以分泌多種細(xì)胞因子，如IFN-γ、TNF-α、IL-2等，不僅對(duì)腫瘤細(xì)胞有直接抑制作用，還可通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)反應(yīng)間接殺傷腫瘤細(xì)胞。 　　

    CIK細(xì)胞能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡：CIK細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中表達(dá)FasL（Ⅱ型跨膜糖蛋白）通過(guò)與腫瘤細(xì)胞膜表達(dá)的Fas（Ⅰ型跨膜糖蛋白）結(jié)合，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。

3、CIK細(xì)胞治療殺瘤特點(diǎn)

1. 增殖速度快 　　

    CIK細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中加入多種細(xì)胞因子后，細(xì)胞增殖速度迅速加快，在培養(yǎng)第22天增殖曲線達(dá)，其中CD3+CD56+細(xì)胞不僅數(shù)量增加1000倍以上，且所占百分比也大幅上升，培養(yǎng)至28～30天時(shí)達(dá)平臺(tái)期，細(xì)胞毒活性亦達(dá)峰值。

2. 殺瘤活性高 　　

    CIK細(xì)胞是以CD3+CD56+T細(xì)胞為主的異質(zhì)細(xì)胞群，大量體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)CIK細(xì)胞較以NK細(xì)胞為主的LAK細(xì)胞具備更強(qiáng)大的殺瘤活性，而且其體內(nèi)殺瘤細(xì)胞毒性的維持不必依賴大劑量外源性IL-2的持續(xù)給予。體外實(shí)驗(yàn)表明CIK細(xì)胞殺傷效率更高。

3.殺瘤譜廣 　

    CIK細(xì)胞因沒(méi)有T 淋巴細(xì)胞殺傷時(shí)的MHC 限制性，故對(duì)于多種腫瘤細(xì)胞系（包括K562、Hela、HL60、OCRF-CEM等）和新鮮腫瘤組織均表現(xiàn)出強(qiáng)大的殺傷活性。

4. 對(duì)多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感 　

    CIK細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感的親本細(xì)胞和不敏感的轉(zhuǎn)化細(xì)胞均具有強(qiáng)大的殺傷活性，兩者比較無(wú)差別。

5. 殺瘤活性不受CsA、FK506等免疫抑制劑的影響 　　

    Mehta觀察到免疫抑制劑CsA和FK506雖然可以抑制抗CD3單抗介導(dǎo)的CIK細(xì)胞脫顆粒過(guò)程，卻不影響靶細(xì)胞誘導(dǎo)的CIK細(xì)胞脫顆粒，并且CIK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷活性不會(huì)因此降低　

6. 對(duì)正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性很小

    實(shí)驗(yàn)證實(shí)CIK細(xì)胞對(duì)正常髓系克隆生成幾乎沒(méi)有影響。 　　

7. 能抵抗腫瘤細(xì)胞引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞Fas-FasL凋亡

4、CIK細(xì)胞治療適應(yīng)癥   

    CIK細(xì)胞治療屬于過(guò)繼細(xì)胞免疫療法，由于CIK細(xì)胞溶瘤作用是非MHC限制性的，即不受腫瘤組織類型的限制，因此對(duì)任何一種腫瘤均有殺傷作用，但對(duì)高抗 原表達(dá)的癌癥療效，如：髓性白血病、黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、轉(zhuǎn)移性腎癌、非何杰金氏淋巴瘤等。其它癌癥如肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、大腸癌 等，CIK細(xì)胞治療亦有較好的療效。CIK細(xì)胞治療適用于任何一期的癌癥患者，但對(duì)早期腫瘤患者或經(jīng)過(guò)手術(shù)及放化療后腫瘤負(fù)荷較小的患者效果好。它對(duì)于手 術(shù)、放化療或造血干細(xì)胞移植后患者體內(nèi)微小殘留病灶的清除，防止癌細(xì)胞擴(kuò)散和復(fù)發(fā)，提高患者自身免疫力，減少毒性反應(yīng)等方面具有重要作用。某些不適合手 術(shù)、不能耐受放化療的中晚期腫瘤患者，CIK細(xì)胞治療可以提高其生活質(zhì)量，延長(zhǎng)帶瘤生存時(shí)間。

5、CIK細(xì)胞治療有效期

    CIK 細(xì)胞通過(guò)直接殺傷、分泌多種細(xì)胞因子等直接抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等途徑起到治療作用。大多數(shù)執(zhí)行殺傷功能的細(xì)胞在回輸后立即執(zhí)行其功能，半 衰期約2周至一個(gè)月。回輸?shù)募?xì)胞中包括一部分記憶細(xì)胞，可存活幾年至幾十年，當(dāng)遇到相應(yīng)刺激后，迅速在體內(nèi)活化，殺傷靶細(xì)胞。所以CIK細(xì)胞治療的療程間 隔原則上為一個(gè)月，建議首先間隔一個(gè)月連續(xù)做三個(gè)療程，以后每半年做一個(gè)療程。

二、DC-CIK細(xì)胞療法

1、DC-CIK細(xì)胞介紹

    DC-CIK細(xì)胞是DC細(xì)胞與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)而獲得的異質(zhì)性細(xì)胞群體。樹突狀細(xì)胞(DC)因成熟時(shí)伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名，它是機(jī)體中功能zui 強(qiáng)的專職抗原遞呈細(xì)胞，能地?cái)z取、加工處理和遞呈抗原。成熟的DC可以通過(guò)Ⅱ型組織相容性抗原（MHC-Ⅱ）等途徑提呈腫瘤抗原，有效抵制腫瘤細(xì)胞的 免疫逃逸機(jī)制。此外，DC細(xì)胞是機(jī)體免疫反應(yīng)的首要環(huán)節(jié)，能夠刺激初始型T細(xì)胞增殖活化，識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞，并能抑制腫瘤血管生成，同時(shí)激發(fā)免疫記憶保 護(hù)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切關(guān)系，是激活機(jī)體免疫系統(tǒng)、激發(fā)抵御癌癥侵襲zui有效的途徑之一。

    在腫瘤免疫中，DC不能直接殺傷腫瘤細(xì)胞，但能通過(guò)識(shí)別腫瘤細(xì)胞特異性抗原，將其信號(hào)呈遞給具殺傷效應(yīng)的T細(xì)胞來(lái)達(dá)到監(jiān)測(cè)、殺滅腫瘤的功能，因此常與腫瘤殺傷細(xì)胞CIK細(xì)胞聯(lián)合使用

2、DC-CIK細(xì)胞治療原理

    1. DC細(xì)胞治療腫瘤的原理

    1.1 DC可以高表達(dá)MHC-Ⅰ類和MHC-Ⅱ類分子，MHC分子與其捕獲加工的腫瘤抗原結(jié)合，形成肽-MHC分子復(fù)合物，并遞呈給T細(xì)胞，從而啟動(dòng)MHC-I類限制性CTL反應(yīng)和MHC-Ⅱ類限制性的CD4+ Thl反應(yīng)。同時(shí)，DC還通過(guò)其高表達(dá)的共刺激分子(CD80/B7-1、CD86/B7-2、CD40等)提供T細(xì)胞活化所必須的第二信號(hào)，啟動(dòng)了免疫應(yīng)答。

    1.2 DC與T細(xì)胞結(jié)合可大量分泌IL-12、IL-18，激活T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)CTL生成，主導(dǎo)Th1型免疫應(yīng)答，利于腫瘤清除；激活穿孔素P、顆粒酶B和FasL/Fas介導(dǎo)的途徑增強(qiáng)NK細(xì)胞毒作用。

    1.3 DC分泌趨化因子(Chemotactic Cytokines，CCK)專一趨化初始型T細(xì)胞，促進(jìn)T細(xì)胞聚集，增強(qiáng)了T細(xì)胞的激活。保持效應(yīng)T細(xì)胞在腫瘤部位長(zhǎng)期存在，可能通過(guò)釋放某些抗血管生 成物質(zhì)(如IL-12、IFN-γ)及前血管生成因子而影響腫瘤血管的形成。上述CCK進(jìn)一步以正反饋旁分泌的方式活化DC，上調(diào)IL-12及CD80、CD86的表達(dá)；同時(shí)DC 也直接向CD8+T細(xì)胞呈遞抗原肽，在活化的CD4+ T細(xì)胞輔助下使CD8+ T細(xì)胞活化，CD4+ 和CD8+T細(xì)胞還可以進(jìn)一步通過(guò)分泌細(xì)胞因子或直接殺傷，增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答。

    2. CIK細(xì)胞治療腫瘤的原理

    2.1 CIK細(xì)胞能以不同的機(jī)制識(shí)別腫瘤細(xì)胞，通過(guò)直接的細(xì)胞質(zhì)顆粒穿透封閉的腫瘤細(xì)胞膜進(jìn)行胞吞。實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的裂解；

    2.2 通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡殺傷腫瘤細(xì)胞；

    2.3 CIK細(xì)胞分泌IL-2、IL-6、IFN-γ等多種抗腫瘤的細(xì)胞因子；

    2.4 CIK細(xì)胞回輸后可以激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，提高機(jī)體的免疫功能。

    將CIK細(xì)胞和同源DC細(xì)胞共培養(yǎng)后即可獲得DC-CIK細(xì)胞。它既可促進(jìn)DC細(xì)胞的成熟，更能促進(jìn)ClK的增殖，并加強(qiáng)其抗腫瘤活性。DC細(xì)胞是機(jī)體免 疫應(yīng)答的始動(dòng)者，能夠誘導(dǎo)持久有力的特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)，CIK細(xì)胞可通過(guò)非特異性免疫殺傷作用清除腫瘤患者體內(nèi)微小殘余病灶，所以負(fù)載腫瘤抗原的DC 與CIK的有機(jī)結(jié)合（即DC-CIK細(xì)胞）能產(chǎn)生特異性和非特異性的雙重抗腫瘤效應(yīng)。

3、DC-CIK細(xì)胞治療方法

    1、治療流程：

    確定患者的入選標(biāo)準(zhǔn)→相關(guān)檢查→血液采集→分離外周血單個(gè)核細(xì)胞→分別培養(yǎng)DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞→DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞共同培養(yǎng)→獲得DC-CIK細(xì)胞→細(xì)胞回輸→療效評(píng)估→隨訪

    2、培養(yǎng)方法

    2.1 治療前檢查血常規(guī)、凝血功能等常規(guī)項(xiàng)目；

    2.2 用血液分離機(jī)采集病人外周血淋巴細(xì)胞或直接采集外周血；

    2.3 在GMP實(shí)驗(yàn)室里，從采集的外周血中分離出單個(gè)核細(xì)胞，經(jīng)多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)、激活后進(jìn)行增殖培養(yǎng)，此過(guò)程需要9-12天；

    2.4 于培養(yǎng)的第9-13天開(kāi)始分次回輸CIK細(xì)胞和DC細(xì)胞，每次回輸過(guò)程大概1.5個(gè)小時(shí)；

    2.5 一個(gè)療程約14-16天。此后視情況進(jìn)行下一療程治療。

4、DC-CIK細(xì)胞治療特點(diǎn)

    1、細(xì)胞毒活性及增殖能力強(qiáng)，細(xì)胞因子分泌量大，療效顯著；

    2、特異性強(qiáng)，只對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行有效識(shí)別和殺滅，而不傷害正常組織和細(xì)胞；

    3、抗瘤譜廣，對(duì)體內(nèi)各種腫瘤細(xì)胞均能有效治療；

    4、安全性好，無(wú)毒副作用，除可能出現(xiàn)的發(fā)熱、少量出血外，無(wú)其他不良反應(yīng)。

    5、減少惡性腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，可顯著增強(qiáng)腫瘤患者免疫系統(tǒng)功能，有利于清除術(shù)后體內(nèi)殘留的癌細(xì)胞（及微轉(zhuǎn)移灶），降低局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生。

5、DC-CIK細(xì)胞治療療效

    CIK細(xì)胞和DC細(xì)胞是細(xì)胞免疫治療的2個(gè)重要組成部分，DC細(xì)胞就像“雷達(dá)”，能識(shí)別抗原，激活免疫應(yīng)答。CIK細(xì)胞就像“導(dǎo)彈”，能通過(guò)發(fā)揮自身細(xì)胞 毒性，分泌細(xì)胞因子，殺傷腫瘤細(xì)胞。“雷達(dá)+導(dǎo)彈”產(chǎn)生了一個(gè)和諧的免疫體系，兩者聯(lián)合能夠修復(fù)受損的免疫系統(tǒng)，激活機(jī)體的免疫細(xì)胞，有效清除手 術(shù)、放療、化療后殘余的癌細(xì)胞，預(yù)防復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，可增強(qiáng)放療、化療的敏感性，減少放、化療的毒副作用，增強(qiáng)患者對(duì)放、化療的耐受性，明顯改善患者的生活質(zhì) 量，有效延長(zhǎng)生存期。

6、DC-CIK細(xì)胞治療實(shí)用范圍

    由于DC-CIK細(xì)胞發(fā)揮識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞的功能不受MHC等因素限制，因此具有廣譜抗腫瘤作用，臨床可應(yīng)用于多種癌癥不同階段的治療（Ｔ細(xì)胞淋巴癌/瘤除外）。

1、呼吸系統(tǒng)：肺癌（小細(xì)胞肺癌、鱗癌、腺癌）等

2、消化系統(tǒng)：肝癌、胃癌、腸癌等

3、泌尿系統(tǒng)：腎癌、腎上腺癌及其轉(zhuǎn)移癌等

4、血液系統(tǒng)：急慢性白血病、淋巴瘤（除T細(xì)胞淋巴瘤）及其轉(zhuǎn)移癌等

5、其他腫瘤：惡性黑色素瘤、鼻咽瘤、乳腺癌、宮頸癌、前列腺癌、舌癌、甲狀腺癌等所有實(shí)體腫瘤，還包括腫瘤轉(zhuǎn)移，以及惡性胸水、惡性腹水等。

三、NK細(xì)胞療法

1、NK細(xì)胞簡(jiǎn)介

    自然殺傷細(xì)胞（NK cell, Natural killer cell）是一種細(xì)胞質(zhì)中具有大顆粒的細(xì) 胞，也稱NK細(xì)胞，由骨髓細(xì)胞發(fā)育而成。因?yàn)槠浞菍Ｒ恍缘募?xì)胞毒殺作用而被命名。NK細(xì)胞主要分布于外周血中，占外周血單核細(xì)胞（PBMC）的 5%～10%，淋巴結(jié)和骨髓中也存在NK細(xì)胞，水平較外周血低，但它可以消滅許多種病源體及多種腫瘤細(xì)胞。自然殺傷細(xì)胞會(huì)直接和陌生細(xì)胞接觸，并以細(xì)胞膜 破裂之方式殺死此細(xì)胞，可利用分泌穿孔素及腫瘤壞死因子，摧毀目標(biāo)細(xì)胞。目前研究認(rèn)為NK 細(xì)胞特異性表達(dá)CD56，而缺乏T 細(xì)胞抗原CD3。一般認(rèn)為在PBMC中分選到CD3- / CD56+的細(xì)胞即為NK細(xì)胞。

    NK細(xì)胞屬于粒狀淋巴細(xì)胞，是先天性免疫系統(tǒng)的重要組成部分，也是機(jī)體抗御感染和防止細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的重要免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞。它對(duì)靶細(xì)胞殺傷時(shí)既不需特異性抗體參加，也不需抗原預(yù)先致敏。卻能立即發(fā)揮非特異性殺傷靶細(xì)胞的作用，尤其是對(duì)多種腫瘤細(xì)胞有迅速殺傷和溶解作用。因此，NK細(xì)胞對(duì)癌癥的監(jiān)視作用和抵抗功能已越來(lái)越受到重視。

2、NK細(xì)胞的活化

    NK細(xì)胞可通過(guò)多種途徑被活化，包括細(xì)胞膜表面的CD2、CD3分子和多種細(xì)胞因子。

    1. 通過(guò)CD3分子的ζ鏈

    NK細(xì)胞不表達(dá)TCR/CD3復(fù)合物，但部分NK細(xì)胞表達(dá)CD3ζ鏈，當(dāng)用CD16抗體刺激NK細(xì)胞活化時(shí)，ζ鏈發(fā)生酪氨酸磷酸化，引起胞漿內(nèi)Ca2+ 濃度升高，IP3水平增加，促進(jìn)細(xì)胞因子合成和ADCC作用。

    2. 通過(guò)CD2分子

    CD2與CD58相互作用或用CD2 McAb刺激可活化NK細(xì)胞，CD3 ζ鏈發(fā)生酪氨酸磷酸化。

    3. 自然殺傷細(xì)胞刺激因子

    自然殺傷細(xì)胞刺激因子（natural killer cell stimulatory factor, NKSF) 對(duì)NK細(xì)胞有刺激作用。

IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白細(xì)胞調(diào)節(jié)素(leukoregulin, LR) 對(duì)NK細(xì)胞的活化和分化有正調(diào)節(jié)作用， 體外培養(yǎng)時(shí)加入上述細(xì)胞因子可明顯提高NK的殺傷活性。

    3、NK細(xì)胞的功能

    1. 自然殺傷活性，NK細(xì)胞的殺傷活性無(wú)MHC限制，不依賴抗體，可以直接通過(guò)分泌釋放穿孔素、顆粒酶、NK細(xì)胞毒性因子、TNF-α和TNF-β等對(duì)病毒感染的細(xì)胞、白血病細(xì)胞以及其他腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒活性，從而殺傷或者裂解靶細(xì)胞；

    2. 抗病毒感染，NK可選擇性地殺傷病毒感染的靶細(xì)胞。由輔佐細(xì)胞或NK細(xì)胞所產(chǎn)生的IFN可協(xié)同NK的抗病毒作用，而對(duì)正常細(xì)胞有保護(hù)作用。另一方面，病毒 感染細(xì)胞表面的病毒抗原和其它表面分子使得其對(duì)NK細(xì)胞的殺傷作用變得更加敏感。此外，NK細(xì)胞在體外還可殺傷某些細(xì)菌、真菌、原蟲等，可能與NK細(xì)胞釋 放某些殺傷介質(zhì)有關(guān)。

    3. NK細(xì)胞在免疫監(jiān)視、殺傷突變的腫瘤細(xì)胞可能比T細(xì)胞具有更重要的作用。某些疾病如Chediak-Higashi或X性聯(lián)淋巴增殖綜合征患者， 由于NK功能缺陷對(duì)惡性淋巴細(xì)胞增殖疾病特別易感。

    4. 參與骨髓移植后移植物抗白血病效應(yīng)：在體外NK細(xì)胞可殺傷某些淋巴樣和髓樣白血病細(xì)胞。骨髓移植后數(shù)周內(nèi)，來(lái)自供體的NK細(xì)胞在PBL中占相當(dāng)高的比例。此外，在體內(nèi)NK細(xì)胞還可殺傷某些不成熟細(xì)胞如骨髓干細(xì)胞、胸腺細(xì)胞亞群等。 (graft-versus-leukemia effect,GVL)

4、NK細(xì)胞抗腫瘤機(jī)理

    NK細(xì)胞的抗腫瘤作用機(jī)理復(fù)雜，可能通過(guò)不同的機(jī)制殺傷瘤細(xì)胞：

    1.由穿孔素、顆粒酶介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞壞死；

    2. NK細(xì)胞直接與腫瘤細(xì)胞接觸，由NK細(xì)胞表面的膜型TNF介導(dǎo)瘤細(xì)胞的凋亡或NK細(xì)胞釋放的分泌型TNF間接介導(dǎo)瘤細(xì)胞的凋亡；

    3. NK細(xì)胞破壞或活化腫瘤微血管系統(tǒng)，導(dǎo)致其他效應(yīng)細(xì)胞和細(xì)胞毒分子滲出到腫瘤組織，引起腫瘤的出血壞死。

5、NK細(xì)胞治療方法

    1、治療流程：

    確定患者的入選標(biāo)準(zhǔn)→相關(guān)檢查→血液采集→分離外周血單個(gè)核細(xì)胞→培養(yǎng)NK細(xì)胞→獲得NK細(xì)胞→細(xì)胞回輸→療效評(píng)估→隨訪

    2、培養(yǎng)方法：

    1、治療前檢查血常規(guī)、凝血功能等常規(guī)項(xiàng)目；

    2、用血液分離機(jī)采集病人外周血淋巴細(xì)胞或直接采集外周血；

    3、在GMP實(shí)驗(yàn)室里，從采集的外周血中分離出單個(gè)核細(xì)胞，經(jīng)多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)、激活后進(jìn)行增殖培養(yǎng)，此過(guò)程需要9-12天。

    4、于培養(yǎng)的第9-13天開(kāi)始分次回輸NK細(xì)胞，每次回輸過(guò)程大概1.5個(gè)小時(shí)。

    5、一個(gè)療程約14-16天。此后視情況進(jìn)行下一療程治療。

6、NK細(xì)胞治療特點(diǎn)

    1、可直接識(shí)別、殺死癌細(xì)胞，抑制腫瘤的生長(zhǎng)及擴(kuò)散；

    2、可直接改善和調(diào)節(jié)患者的免疫力和神經(jīng)系統(tǒng)；

    3、通過(guò)其分泌的因子抑制腫瘤附近新血管的增生，限制腫瘤生長(zhǎng)；

    4、分泌多種細(xì)胞因子，減少患者疼痛，提高生活品質(zhì)；

    5、NK細(xì)胞療法可用于多種癌癥，尤其對(duì)血液腫瘤，肺癌、淋巴癌、食道癌、乳癌、肝癌等血流旺盛且血管較密集的腫瘤有很好的療效。

四、多細(xì)胞療法

1、多細(xì)胞治療簡(jiǎn)介

    多細(xì)胞治療是在原先DC-CIK細(xì)胞免疫治療基礎(chǔ)上增加三種細(xì)胞，它們分別為NK細(xì)胞、γδT細(xì)胞、CD3AK細(xì)胞，通過(guò)5種細(xì)胞聯(lián)合治療，相互協(xié)作，互 通有無(wú)，zui終將癌細(xì)胞殺傷，控制住病情，成為癌癥治療zui為有效的技術(shù)手段。有效抑制腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的治療技術(shù)。

    DC細(xì)胞，尋找腫瘤細(xì)胞的“雷達(dá)”，能識(shí)別抗原，激活免疫應(yīng)答；CIK細(xì)胞就像“導(dǎo)彈”，通過(guò)發(fā)揮自身細(xì)胞毒性分泌細(xì)胞因子，殺傷腫瘤細(xì)胞；NK細(xì)胞 可以殺傷腫瘤干細(xì)胞，而腫瘤干細(xì)胞是造成腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的元兇；γδT細(xì)胞具有腫瘤干細(xì)胞殺傷能力和輔助DC疫苗腫瘤識(shí)別能力；CD3AK細(xì)胞是一種新型 抗腫瘤免疫活性細(xì)胞，能在廣譜殺瘤的基礎(chǔ)上，有效抑制腫瘤生長(zhǎng)，達(dá)到抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。多細(xì)胞治療中這5種細(xì)胞彼此間相互協(xié)作，互通有無(wú)，具有更強(qiáng)的靶 向性和更高的殺傷腫瘤活性。

2、多細(xì)胞免疫治療原理

    多細(xì)胞治療原理和DC-CIK細(xì)胞一樣，都是通過(guò)采集患者外周血分離單個(gè)核細(xì)胞，在GMP實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞分離，誘導(dǎo)，擴(kuò)增，激活等方式培養(yǎng)出高品質(zhì)的細(xì)胞，然后將這些細(xì)胞分多次回輸?shù)交颊唧w內(nèi)。

    多細(xì)胞治療主要是通過(guò)DC細(xì)胞、CIK細(xì)胞、NK細(xì)胞、γδT細(xì)胞和CD3AK細(xì)胞，這種細(xì)胞被上稱為zui經(jīng)典組合細(xì)胞，治療癌癥效果非常明顯。

    具體分工為：DC細(xì)胞入人體調(diào)動(dòng)機(jī)體免疫系統(tǒng)，對(duì)腫瘤抗原進(jìn)行標(biāo)記，然后指揮免疫細(xì)胞群CIK細(xì)胞、NK細(xì)胞、γδT細(xì)胞和CD3AK細(xì)胞進(jìn)行殺 傷；CIK細(xì)胞具有廣譜的殺傷癌細(xì)胞功能，對(duì)標(biāo)記的癌細(xì)胞進(jìn)行廣泛殺傷；NK細(xì)胞可以有效殺傷腫瘤干細(xì)胞，同時(shí)也具有殺傷成熟癌細(xì)胞功能；γδT細(xì)胞在殺 傷癌細(xì)胞的同時(shí)又與DC細(xì)胞互為補(bǔ)充，對(duì)DC無(wú)法識(shí)別的癌細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記殺傷；CD3AK細(xì)胞針對(duì)病毒癌細(xì)胞具有*殺傷力。

3、 多細(xì)胞治療的特點(diǎn)

    1. 多細(xì)胞治療對(duì)腫瘤殺傷力更強(qiáng)，靶向性更強(qiáng)；

    2. *自體細(xì)胞，*和排斥反應(yīng)；

    3. 從源頭上治療腫瘤，*清除癌細(xì)胞，zui大限度地防止復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移；

    4. 治療效果與患者生活質(zhì)量并重，保障顯著療效的同時(shí)大大提高患者生活質(zhì)量。

4、多細(xì)胞免疫治療種類及功能

    DC細(xì)胞，即樹突狀細(xì)胞， 它是目前所知人體內(nèi)功能zui強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞，因其成熟的時(shí)候，伸出許多樹突或偽足樣突起而得名。DC細(xì)胞能參與腫瘤抗原的識(shí)別、加工處理與提呈，刺激初始 型T細(xì)胞增殖活化，識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞，并能抑制腫瘤血管生成，同時(shí)激發(fā)免疫記憶保護(hù)。當(dāng)負(fù)載有腫瘤抗原信息的DC細(xì)胞輸入人體后，將腫瘤信息傳遞給抗腫 瘤細(xì)胞，使其具有識(shí)別能力，充分調(diào)動(dòng)，有效殺滅腫瘤細(xì)胞。

    CIK細(xì)胞，即細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞，在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子共同誘導(dǎo)、培養(yǎng)而成的一類擁有高細(xì)胞毒性的細(xì)胞，具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和非MHC限 制性殺瘤特點(diǎn)，殺傷腫瘤細(xì)胞，殺傷活性可達(dá)84.7%，同時(shí)有效抑制腫瘤生長(zhǎng)，不損傷任何正常組織細(xì)胞，其效應(yīng)細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，毒副作用小。CIK細(xì) 胞的抗腫瘤價(jià)值主要在于殺瘤活性強(qiáng)、廣譜殺瘤。常用于治療各種腫瘤，對(duì)低表達(dá)MHC-I、II類分子的腫瘤效果更好。

    NK細(xì)胞，即自然殺傷細(xì)胞，是人體先天免疫的核心組成部分，是腫瘤細(xì)胞免疫的基礎(chǔ)。NK細(xì)胞是人體內(nèi)抗癌活性zui強(qiáng)的細(xì)胞，可直接殺死癌細(xì)胞，抑制腫瘤的生 長(zhǎng)及擴(kuò)散；循環(huán)的NK細(xì)胞一旦激活，它們會(huì)滲透到大多數(shù)組織中攻擊腫瘤細(xì)胞。它是人體免疫系統(tǒng)的*道防線，與機(jī)體的抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功能密切相關(guān)。NK 細(xì)胞可用于治療各種腫瘤，廣泛識(shí)別腫瘤細(xì)胞，分泌穿孔素及腫瘤壞死因子，迅速溶解、殺傷、摧毀腫瘤細(xì)胞，其自然殺傷活性無(wú)MHC限制（無(wú)免疫應(yīng)答、移植排 斥限制），起效快、殺傷能力強(qiáng)，對(duì)于引起腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的腫瘤干細(xì)胞（突變腫瘤細(xì)胞）擁有專一性的細(xì)胞毒殺作用，同時(shí)在機(jī)體免疫監(jiān)視機(jī)制中起到比單一T細(xì) 胞更重要的作用，在低表達(dá)MHC-Ⅰ、Ⅱ類分子的腫瘤和惡性血液疾病治療方面效果更好，其zui顯著的抗腫瘤價(jià)值在于NK細(xì)胞可以殺傷腫瘤干細(xì)胞，而腫瘤干細(xì) 胞是造成腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的元兇。

    γδT細(xì)胞是介于特異性免疫與非特異性免疫之間的一種特殊類型的免疫細(xì)胞，其主要分布于 皮膚和黏膜組織，在腫瘤免疫治療中起著 非常重要的作用。γδT細(xì)胞在抗腫瘤免疫早期, 即可提供IFN-γ因子抑制腫瘤生長(zhǎng)，發(fā)揮專職性抗原遞呈細(xì)胞的作用，同時(shí)兼具有DC疫苗及NK等細(xì)胞的功能特點(diǎn)，有較強(qiáng)的特異性（DC疫苗補(bǔ)充）和非特 異性腫瘤殺傷能力（識(shí)別、殺傷腫瘤干細(xì)胞，靶向性強(qiáng)），尤其對(duì)于粘膜相關(guān)性腫瘤（如消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)等腫瘤）和惡性血液疾病（如多發(fā)性骨髓 瘤、粒細(xì)胞性白血病、淋巴細(xì)胞型白血病等）效果更好。

    CD3AK細(xì)胞是由抗CD3單克隆抗體和IL-2共同激活誘導(dǎo)的腫瘤殺傷細(xì)胞，通過(guò)分泌可溶性細(xì)胞因子參與對(duì)腫瘤直接或間接的殺傷，具有強(qiáng)體外增殖能力、 細(xì)胞毒活性，顯著殺傷腫瘤細(xì)胞，并在廣譜殺瘤的基礎(chǔ)上，有效抑制腫瘤生長(zhǎng)，達(dá)到抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。CD3AK細(xì)胞用于治療各種腫瘤，尤其對(duì)于病毒相 關(guān)性腫瘤（如宮頸癌、肝癌、鼻咽癌、B細(xì)胞淋巴瘤等）效果更好。

5、多細(xì)胞免疫治療療效

    多細(xì)胞生物免疫治療目前是世界上治療腫瘤的技術(shù)，是繼手術(shù)、放療及化療后腫瘤治療的第四種模式。生物免疫治療主要是調(diào)動(dòng)人 體的天然抗癌能力，恢復(fù)機(jī)體內(nèi)環(huán)境的平衡，可以殺死手術(shù)后殘余癌細(xì)胞，提升放化療治療效果，提高患者機(jī)體免疫能力，更好的防轉(zhuǎn)移，防復(fù)發(fā)。對(duì)放化療起 到減毒增效的作用，有利于放化療的順利進(jìn)行。生物治療效果明顯、無(wú)毒副作用、安全性及耐受性好等優(yōu)點(diǎn) ，被稱之為腫瘤治療的“綠色療法”。對(duì)于不能耐受手術(shù)或放化療的癌癥患者，該療法可以反復(fù)殺傷腫瘤細(xì)胞，增強(qiáng)患者免疫功能，提高臨床療效 ，延長(zhǎng)生存期，提高生命質(zhì)量，大大減輕了治療給腫瘤患者帶來(lái)的痛苦。

6、多細(xì)胞免疫治療的適應(yīng)癥

    多細(xì)胞生物免疫治療法適用于多種實(shí)體腫瘤，包括惡性黑色素瘤、前列腺癌、腎癌、膀胱癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、直腸癌、乳腺癌、宮 頸癌、肺癌、喉癌、鼻咽癌、胰腺癌、肝癌、胃癌等實(shí)體瘤手術(shù)后防止復(fù)發(fā)，也可以用于多發(fā)性骨髓瘤、B淋巴瘤和白血病等血液系統(tǒng)惡性腫瘤的復(fù)發(fā)，對(duì)于大多數(shù) 細(xì)胞免疫治療的適應(yīng)人群還可以用于上述腫瘤的進(jìn)一步鞏固治療，達(dá)到延長(zhǎng)生存期、提高生活質(zhì)量和抑制腫瘤惡化的目的。但不適用于T細(xì)胞淋巴瘤患者、器官移植 后長(zhǎng)期使用免疫抑制藥物和正在使用免疫抑制藥物的自身免疫病的患者。